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尿嘧啶核苷酸(UMP)液相色譜檢測方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2025-04-16 | 193 次瀏覽 | 分享到:
尿嘧啶核苷酸與胞苷酸一起構(gòu)成RNA的嘧啶核苷酸部分,是UTP,CTP合成的前體物質(zhì),由乳清酸核苷-5-磷酸經(jīng)酶催化脫羧而成。它在細胞內(nèi)的作用,主要是參與核酸合成,維持細胞正常的生理代謝,調(diào)節(jié)蛋白的轉(zhuǎn)錄和基因的表達。分子式 C9H13N2O9P,分子量324.18。對紫外線有強烈吸收性能。由尿嘧啶、核糖和磷酸連接而成。常應用于醫(yī)療和健康應用,具有抗衰老和健康維護方面。

尿嘧啶核苷酸與胞苷酸一起構(gòu)成RNA的嘧啶核苷酸部分,是UTP,CTP合成的前體物質(zhì),由乳清酸核苷-5-磷酸經(jīng)酶催化脫羧而成。它在細胞內(nèi)的作用,主要是參與核酸合成,維持細胞正常的生理代謝,調(diào)節(jié)蛋白的轉(zhuǎn)錄和基因的表達。分子式 C9H13N2O9P,分子量324.18。對紫外線有強烈吸收性能。由尿嘧啶、核糖和磷酸連接而成。常應用于醫(yī)療和健康應用,具有抗衰老和健康維護方面。



檢測方法,科研實驗室一般采用高效液相色譜(HPLC)或液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)。以HPLC為例,簡單的介紹一下檢測流程。


1.樣品處理


精確稱取0.2g樣品到2ml的離心管中,加入1ml的2.5%高氯酸水溶液,混合振蕩1min,低溫超聲20min,13000r/min離心20min,取上清液0.45um膜過濾,待測。


2.色譜條件


TSKgel ODS-100V的色譜柱,長250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5um;柱溫25℃。VWD檢測器,259nm。流動相:0.035mol/L 磷酸二氫鈉(pH=6.8)等度洗脫,流速1ml/min,進樣量10uL。



3.標準曲線


使用標準品,使用有機溶劑溶解,梯度稀釋至少6個點。按色譜條件,測定對應的色譜峰。對色譜峰面積進行積分,結(jié)合標準的溶液,繪制標準曲線,得到回歸方程。


4.樣品測定和計算


將處理好的樣品上機測定色譜峰,保留時間和標準品的保留時間是一致的。對色譜峰面積進行積分,根據(jù)回歸方程,計算出樣品中尿嘧啶核苷酸(UMP)含量。


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