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植物多酚氧化酶檢測方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-06-04 | 304 次瀏覽 | 分享到:

多酚氧化酶是一種含銅的氧化還原酶,它廣泛分布在植物、真菌、昆蟲的質體,甚至在腐爛的植物殘渣上都檢測到它的存在。此外,多酚氧化酶能夠催化鄰苯二酚氧化成鄰苯二醌。在茶葉中,多酚氧化酶能夠催化兒茶素形成鄰醍,進而形成茶黃素和香氣物質。因此,為了讓茶葉的品質更高,香氣更純正,往往要控制多酚氧化酶的活性。多酚氧化酶可以做成食品添加劑,可以提高啤酒的質量。



在植物(如蘋果、荔枝、菠菜、馬鈴薯、豆類、茶葉、桑葉等)組織中,多酚氧化酶與內囊體膜結合在一起的,天然狀態(tài)無活性,但將組織勻漿或損傷后多酚氧化酶被活化,從而表現出活性。植物多酚氧化酶能夠氧化植物多酚,通過檢測植物多酚被氧化的程度,可以反應多酚氧化酶的活力,檢測多酚氧化酶一般用到分光光度法。鄰苯二酚和D-兒茶素在多酚氧化酶催化下生成有色產物,其顯色物質在460nm處有最大吸收,吸收值在單位時間內的變化和單位酶活性成正比,計算多酚氧化酶活性。



樣品和材料的準備,樣品就準備植物的葉片或果實,多酚底物就用多巴胺。中間參與的試劑有磷酸鹽溶液、酸化酒石酸鈉溶液、苯酚酸溶液等。將樣品組織進行粉碎,用磷酸鹽緩沖液,攪拌2min,離心10min,提取上清液備用。將多巴胺溶液加入酸化酒石酸鈉的溶液中,制成濃度為0.01mol/L的底物溶液。



取適量的植物提取液和底物發(fā)生反應,混合后在25℃的水浴中1min,加入苯酚酸溶液終止反應,并迅速混勻。吸取反應后的溶液,在可見風光光度計上420nm的波長處測定吸光度值。測定樣品中的多酚氧化酶,還是要用到標準曲線,根據標準品的濃度和吸光度之間的線性關系,計算出樣品中含有多酚氧化酶的含量。


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