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葉黃素含量檢測(cè)方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-06-05 | 396 次瀏覽 | 分享到:

廣義的葉黃素是指類胡蘿卜素、葉黃素等,植物葉黃素是一種存在于蔬菜、花卉、水果等植物中的天然有機(jī)物質(zhì),目前已知的自然界中的類胡蘿卜素有600多種。葉黃素存在于蔬菜中,一般顏色越深的蔬菜,其中所含有的葉黃素也越高,也并不是絕對(duì)的。比如在菠菜、蘆筍、萵苣、芥藍(lán)等蔬菜中,都含有豐富的葉黃素。



葉黃素是一種含氧的類胡蘿卜素,在萬壽菊、香蕉、獼猴桃、玉米等植物中也廣泛存在。它是天然的抗氧化劑,能夠吸收藍(lán)光等有害光線,保護(hù)眼睛不受有害光損害。同時(shí),還抵御人體內(nèi)的自由基,防止細(xì)胞或器官收到損傷,預(yù)防機(jī)體衰老等。



檢測(cè)植物體內(nèi)的葉黃素含量,一般采用的方法有高效液相色譜(HPLC)法、分光光度法等。


1.高效液相色譜(HPLC)法


HPLC檢測(cè)葉黃素含量是目前比較普遍的方法,它是通過將葉黃素的樣品溶解提取,注入HPLC的色譜柱,在流動(dòng)相的作用下分離,利用紫外檢測(cè)器進(jìn)行讀取數(shù)據(jù),記錄峰高和峰面積,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法來計(jì)算樣品中所含有的葉黃素含量。需要準(zhǔn)備的是與之匹配的C18色譜柱和紫外檢測(cè)器,葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品,甲醇和乙腈的流動(dòng)相。檢測(cè)波長(zhǎng)、流速、進(jìn)樣量等參數(shù),可以根據(jù)已有的標(biāo)準(zhǔn),或進(jìn)行驗(yàn)證以確定最佳的條件,獲得相對(duì)理想的檢測(cè)圖譜和數(shù)據(jù)。



制作標(biāo)準(zhǔn)曲線是檢測(cè)的必要條件,精密稱量葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品,制備成標(biāo)準(zhǔn)溶液。設(shè)置梯度進(jìn)樣濃度,在最佳的色譜條件下,上機(jī)檢測(cè)獲得對(duì)應(yīng)的色譜峰。以葉黃素峰面積和進(jìn)樣濃度呈一定的線性關(guān)系,制作呈標(biāo)準(zhǔn)曲線,并計(jì)算出回歸方程。下面,就要對(duì)樣品進(jìn)行處理,和標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)同樣的條件下進(jìn)行檢測(cè),測(cè)定的結(jié)果結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以計(jì)算出樣品中的葉黃素含量。


2. 分光光度法:


該方法利用葉黃素在堿性條件下與醛類試劑反應(yīng)產(chǎn)生有色產(chǎn)物,對(duì)特定波長(zhǎng)的光進(jìn)行吸收,通過測(cè)量吸光度來定量測(cè)量葉黃素的含量??梢允褂米贤?可見分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)量,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出樣品中葉黃素含量。


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