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視黃醇含量測定方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2025-07-11 | 205 次瀏覽 | 分享到:
視黃醇是維生素A的形式之一,是維生素A的衍生物,它主要來自豬肝、胡蘿卜、蘋果、芒果等。視黃醇的化學式為C20H30O,分子量為286.45,是一種脂溶性的維生素,具有酯環(huán)結(jié)構(gòu),含有5個共軛雙鍵?;瘜W性質(zhì)活潑,如氧氣、陽光等因素,很容易被氧化分解或異構(gòu)化。視黃醇可溶于甲醇、氯仿、醚等有機溶劑,幾乎不溶于水或甘油。它可促進生成膠原蛋白,加速角質(zhì)代謝,調(diào)節(jié)細胞分化等,常用于護膚和醫(yī)學等領域。

視黃醇是維生素A的形式之一,是維生素A的衍生物,它主要來自豬肝、胡蘿卜、蘋果、芒果等。視黃醇的化學式為C20H30O,分子量為286.45,是一種脂溶性的維生素,具有酯環(huán)結(jié)構(gòu),含有5個共軛雙鍵。化學性質(zhì)活潑,如氧氣、陽光等因素,很容易被氧化分解或異構(gòu)化。視黃醇可溶于甲醇、氯仿、醚等有機溶劑,幾乎不溶于水或甘油。它可促進生成膠原蛋白,加速角質(zhì)代謝,調(diào)節(jié)細胞分化等,常用于護膚和醫(yī)學等領域。


檢測樣本中視黃醇的含量,實驗室一般采用高效液相色譜(HPLC)、液相串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)、酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法、分光光度法等。這里以HPLC為例,簡單的介紹一下檢測的流程。


1.樣本前處理


假如是血清的樣本,可取0.5ml的血清,加入1ml的乙腈,振蕩混勻60s,在12000rpm的離心機中旋轉(zhuǎn)15min。取上清液,加入2ml的正己烷萃取,轉(zhuǎn)移有機相,使用氮吹干。再加入100uL的甲醇復溶,待測。


2.色譜條件


如果要測的是視黃醇的單體含量,可用甲醇和水(85:15)為流動相,等度洗脫,或者采用乙腈和四氫呋喃,梯度洗脫。使用常規(guī)的反相色譜柱C18,250mm長,4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑。柱溫的話,不能隨意設置的,一般在30-40℃,溫度波動不要太大,否則會影響到出峰或基線的穩(wěn)定性。一般的流速可設置為1ml/min,進樣量10-20uL。紫外檢測器,波長325-340nm。根據(jù)樣本的復雜程度進行調(diào)整。


3.標準曲線


將視黃醇的標準品通過甲醇溶解,定容到一定體積,配制成標準母液。梯度稀釋5-7個濃度點,這個稀釋的倍數(shù)是根據(jù)樣本的濃度來確定的。確保標準溶液稀釋的范圍能夠覆蓋到樣本濃度的可能范圍,確定一下檢測限。依次進樣到HPLC中,記錄色譜峰的保留時間,對色譜峰面積進行積分,擬合出標準曲線,得到回歸方程,相關系數(shù)1≥R2≥0.999,回收率>90%,RSD符合要求。


4.含量測定


樣本進樣到HPLC中,根據(jù)保留時間,找到視黃醇的色譜峰。對色譜峰面積進行積分,因為色譜條件是不變的,可以代入到回歸方程,計算出樣本溶液中的視黃醇含量。


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