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次黃嘌呤核苷酸(IMP)含量測定方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2025-07-15 | 229 次瀏覽 | 分享到:
次黃嘌呤核苷酸(IMP)是生物體內(nèi)的一種嘌呤核苷酸,是由次黃嘌呤、核糖和磷酸基團組成的。在體內(nèi)起著重要的作用,如核酸合成、能量傳遞、細胞信號調(diào)控等。次黃嘌呤核苷酸(IMP)是腺嘌呤核苷酸(AMP)和鳥嘌呤核苷酸(GMP)的共同前體,IMP是經(jīng)過磷酸戊糖途徑和多步的酶促反應(yīng)而合成的,可被水解為次黃苷和磷酸,進一步分解為尿酸排出體外。

次黃嘌呤核苷酸(IMP)是生物體內(nèi)的一種嘌呤核苷酸,是由次黃嘌呤、核糖和磷酸基團組成的。在體內(nèi)起著重要的作用,如核酸合成、能量傳遞、細胞信號調(diào)控等。次黃嘌呤核苷酸(IMP)是腺嘌呤核苷酸(AMP)和鳥嘌呤核苷酸(GMP)的共同前體,IMP是經(jīng)過磷酸戊糖途徑和多步的酶促反應(yīng)而合成的,可被水解為次黃苷和磷酸,進一步分解為尿酸排出體外。

檢測方法:高效液相色譜(HPLC)或液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)。


1.樣品處理


精確稱取0.2000g樣品,放入2mL 離心管,再加 1mL 2.5%高氯酸水溶液,放置振蕩器混勻 1min,低溫超聲20min,13000r/min 離心 20min,取上清液過 0.45μm濾膜,待液相色譜測定。


2.色譜條件


C18色譜柱,250mm長,4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑,柱溫30℃;以甲醇-水(2:98)為流動相,等度洗脫,流速1ml/min。紫外檢測器,波長254nm。進樣量10uL。有的用的色譜柱不一樣,對應(yīng)的流動相也會有所差別。比如,用ODS-100V(250*4.6mm,5μm)的色譜柱,0.035mol/L 磷酸二氫鈉(pH=6.8)等度洗脫。


3.標準曲線


將次黃嘌呤核苷酸(IMP)的標準品用甲醇溶解,配制成標準母液。并進行一系列的梯度稀釋,比如0.5mg/L,1.5mg/L,10mg/L,50mg/L,100mg/L,盡可能的覆蓋到樣品溶液的濃度范圍。進樣到HPLC中,測出色譜峰,記錄峰的保留時間,對峰面積進行積分。在表格中用趨勢圖可擬合出標準曲線,得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)r2要大于0.999并接近于1。有的需要加標回收率,穩(wěn)定性等考慮。


4.含量計算


有了標準曲線,通過測定樣品溶液的色譜峰,保留時間能識別出色譜峰,并對面積進行積分,代入到回歸方程,可計算出樣品溶液中的IMP的含量。


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